本书分为分子生物学实验及生物化学实验两部分,共设计了24个综合性较强的实验,其中14个分子生物学实验以应用广泛的绿色荧光蛋白基因为主线贯穿,涵盖了分子生物学的基本实验技术,包括原核生物细胞转化,质粒DNA的分离纯化,限制性内切酶对质粒DNA的酶切与琼脂糖凝胶电泳鉴定,重组技术,PCR基因扩增,基因突变技术,蛋白质电泳分离表达蛋白,蛋白质转移技术,蛋白质分离纯化技术等。10个生物化学实验涉及常用的电泳技术、亲和色谱技术和免疫学实验技术。
本书作为普通高等教育“十一五”国家级规划教材,是北京大学多年实验教学改革的成果,充分体现了实验内容的综合性,通过学习和训练,学生们在创新性思维和科研动手能力上都会得到很大提高,适合高等院校生命科学类专业本科生和研究生使用。
- 第一部分 分子生物学实验
- 背景资料
- 实验1 绿色荧光蛋白(GFP)基因转入原核细胞
- 实验2 目的基因载体的分离纯化与质量测定
- 实验3 含绿色荧光蛋白基因载体的酶切与电泳鉴定
- 实验4 增强型绿色荧光蛋白基因表达载体的构建
- 实验5 绿色荧光蛋白基因的表达与鉴定
- 实验6 PCR体外扩增绿色荧光蛋白基因及其克隆与表达
- 实验7 红色荧光蛋白、黄色荧光蛋白基因的克隆和在大肠杆菌中的表达
- 实验8 谷胱甘肽转硫酶绿色荧光蛋白融合蛋白的基因克隆及其表达
- 实验9 增强型绿色荧光蛋白的定点突变及表达检测
- 实验10 携带增强型绿色荧光蛋白报告基因的温度敏感型表达载体的构建、鉴定和表达量的测定
- 附录10-1:pBV220全序列(从EcoRⅠ酶切位点第一个A开始)
- 附录10-2:EGFP基因全序列
- 实验11 双报告基因系统的构建及初步检测
- 附录11-1:Luciferase基因全序列
- 附录11-2:萤光素酶检测步骤
- 实验12 以绿色荧光蛋白(GFP)为报告基因构建重组酵母检测环境中雌二醇的含
- 实验13 绿色荧光蛋白的分离、纯化及其鉴定
- 实验14 谷胱甘肽转硫酶与绿色荧光蛋白融合蛋白的分离、纯化和酶学的测定
- 附录Ⅰ
- 第二部 分生物化学实验
- 电泳技术
- 实验15 SDS聚丙烯酰胺凝胶电泳
- 实验16 聚丙烯酰胺凝胶等电聚焦电泳
- 实验17 聚丙烯酰胺凝胶双向电泳亲和色谱技术
- 实验18 鸡卵黏蛋白的分离纯化
- 实验19 胰蛋白酶粗提取与活性测定
- 实验20 亲和色谱分离胰蛋白酶
- 实验21 胰蛋白酶动力学测定免疫学技术
- 实验22 抗血清的制备
- 实验23 抗血清抗体的测定
- 实验24 酶联免疫吸附测定
- 附录Ⅱ