现代分子生物学实验技术手册

随着基因编辑、高通量测序、蛋白质组学等前沿技术的突破性发展，系统掌握分子生物学实验技术已成为生命科学研究者不可或缺的核心能力。本教材的内容涵盖了现代分子生物学常用的研究方法与详细的实验操作流程。全书共10章，分别介绍了基因组DNA的提取和定量、聚合酶链式反应、质粒载体的构建与转化、重组DNA导入宿主细胞、真核细胞RNA的提取和分析、蛋白质的提取和分析、基因敲除或敲降技术，以及蛋白质分别与蛋白质、DNA、RNA之间的相互作用的检测方法等。教材总体按照从基础到综合应用的顺序编写，同时每章均可作为相对独立的专题，有利于读者自主根据需要阅读。

本教材可作为生物学、医药卫生、农林牧渔和检验检疫等学科领域的本科生和研究生教材，同时也可作为有关科研人员和技术人员的重要参考书。

目录
- 前辅文
- 第1章基因组DNA的提取和定量
  - 1.1 大肠杆菌基因组DNA的提取
  - 1.2 酵母基因组DNA的提取
  - 1.3 植物基因组DNA的提取
    - 1.3.1 简易法提取植物DNA
    - 1.3.2 CTAB法提取植物DNA
  - 1.4 动物基因组DNA的提取
  - 1.5 DNA的定量
    - 1.5.1 紫外分光光度法
    - 1.5.2 荧光染料法
- 第2章聚合酶链式反应（PCR）
  - 2.1 基础PCR
    - 2.1.1 引物设计
    - 2.1.2 PCR的反应条件
    - 2.1.3 热稳定DNA聚合酶及推荐的PCR反应
  - 2.2 PCR常见问题
  - 2.3 利用PCR获得目的基因的方法
    - 2.3.1 反转录PCR
    - 2.3.2 反向PCR
    - 2.3.3 热不对称交错PCR
    - 2.3.4 融合PCR
    - 2.3.5 定点诱变
  - 2.4 PCR产物的检测
    - 2.4.1 琼脂糖凝胶电泳
    - 2.4.2 聚丙烯酰胺凝胶电泳
- 第3章质粒载体的构建与转化
  - 3.1 质粒的提取
    - 3.1.1 质粒DNA的小量制备
    - 3.1.2 质粒DNA的大量制备
  - 3.2 质粒的酶切
    - 3.2.1 单酶切
    - 3.2.2 双酶切
  - 3.3 目的基因与载体质粒的连接
    - 3.3.1 酶切连接
    - 3.3.2 重组连接
    - 3.3.3 Gateway重组克隆
    - 3.3.4 吉布森组装
    - 3.3.5 TA克隆
  - 3.4 重组DNA导入大肠杆菌
    - 3.4.1 大肠杆菌感受态的制备与转化（化学法）
    - 3.4.2 大肠杆菌感受态的制备与转化（电转化法）
  - 3.5 重组子的筛选和鉴定
    - 3.5.1 抗性筛选
    - 3.5.2 蓝白斑筛选
    - 3.5.3 菌落PCR
    - 3.5.4 酶切鉴定
    - 3.5.5 测序
- 第4章重组DNA导入宿主细胞
  - 4.1 重组DNA导入酵母表达感受态
  - 4.2 重组DNA导入植物细胞
    - 4.2.1 农杆菌介导的转化
    - 4.2.2 基因枪法
  - 4.3 重组DNA导入动物细胞
    - 4.3.1 磷酸钙转染技术
    - 4.3.2 DEAE-葡萄糖转染技术
    - 4.3.3 电穿孔转染技术
    - 4.3.4 聚乙烯亚胺转染法
    - 4.3.5 显微注射法获得转基因线虫
    - 4.3.6 利用病毒载体向哺乳动物细胞中导入基因
  - 4.4 DNA印迹
- 第5章真核细胞RNA的提取和分析
  - 5.1 RNA的提取
    - 5.1.1 从植物组织中提取总RNA
    - 5.1.2 从哺乳动物的细胞和组织中提取总RNA
  - 5.2 RNA质量的检测
    - 5.2.1 紫外吸收分光光度法测定RNA的浓度
    - 5.2.2 荧光染料法测定RNA的浓度
    - 5.2.3 凝胶电泳法检测RNA的完整度
    - 5.2.4 利用生物分析仪检测RNA的完整度
  - 5.3 转录组测序文库的构建
    - 5.3.1 mRNA测序文库的构建
    - 5.3.2 小分子RNA深度测序文库的构建
  - 5.4 反转录和荧光定量PCR
    - 5.4.1 反转录获得互补DNA
    - 5.4.2 实时荧光定量PCR
    - 5.4.3 反转录和荧光定量PCR分析小分子RNA
  - 5.5 cDNA末端快速扩增
  - 5.6 RNA印迹
    - 5.6.1 利用甲醛琼脂糖凝胶电泳进行RNA印迹
    - 5.6.2 利用尿素聚丙烯酰胺凝胶电泳进行RNA印迹
  - 5.7 降解组测序
  - 5.8 核糖体图谱分析
  - 5.9 原位杂交
- 第6章蛋白质的提取和分析
  - 6.1 蛋白质的提取
  - 6.2 蛋白质的原核表达与纯化
    - 6.2.1 His标签融合蛋白的表达与纯化
    - 6.2.2 MBP标签融合蛋白的表达与纯化
    - 6.2.3 GST标签融合蛋白的表达与纯化
    - 6.2.4 几丁质标签融合蛋白的表达与纯化
  - 6.3 酵母中表达的外源蛋白质的纯化
  - 6.4 昆虫杆状细胞中表达的外源蛋白质的纯化
    - 6.4.1 昆虫细胞中外源蛋白质的表达
    - 6.4.2 昆虫细胞中外源蛋白质的纯化
  - 6.5 蛋白质印迹
  - 6.6 蛋白质染色
    - 6.6.1 考马斯亮蓝染色
    - 6.6.2 蛋白质银染
  - 6.7 蛋白质磷酸化位点的鉴定
- 第7章基因敲除或敲降技术
  - 7.1 RNA干扰
    - 7.1.1 人工miRNA
    - 7.1.2 利用shRNA沉默哺乳动物细胞中基因的表达
    - 7.1.3 利用合成siRNA在哺乳动物细胞中进行RNA干扰
    - 7.1.4 病毒诱导的基因沉默
    - 7.1.5 通过反义寡核苷酸调控基因表达
  - 7.2 CRISPR/Cas9
    - 7.2.1 哺乳动物细胞中的基因编辑
    - 7.2.2 高等植物细胞中的基因编辑
    - 7.2.3 Cas9相关的其他技术的简要介绍
  - 7.3 Cre-loxP系统简介
- 第8章蛋白质与蛋白质之间相互作用的检测
  - 8.1 酵母双杂交及筛库
    - 8.1.1 酵母感受态的制备与转化
    - 8.1.2 酵母双杂交文库的构建
    - 8.1.3 酵母文库的筛选
  - 8.2 GST牵拉沉淀实验
  - 8.3 免疫共沉淀
  - 8.4 萤光素酶互补
  - 8.5 双分子荧光互补
  - 8.6 荧光共振能量转移
  - 8.7 微量热泳动
  - 8.8 等温滴定量热法
  - 8.9 邻近标记技术在蛋白质组学中的应用
    - 8.9.1 利用TurboID介导的邻近标记技术在植物中鉴定邻近蛋白质
    - 8.9.2 利用邻近标记技术在动物细胞中鉴定邻近蛋白质
  - 8.10 通过分子排阻色谱分离蛋白质复合体
  - 8.11 热漂移实验
  - 8.12 生物膜干涉技术
- 第9章蛋白质与DNA之间相互作用的检测
  - 9.1 电泳迁移率变动分析
  - 9.2 酵母单杂交
  - 9.3 双萤光素酶报告基因检测
  - 9.4 染色质免疫沉淀
  - 9.5 CUT&Tag
    - 9.5.1 pG-Tn5转座酶的表达与纯化
    - 9.5.2 转座子组装及活性的测定
    - 9.5.3 以哺乳动物细胞为例的CUT&Tag操作
  - 9.6 DNA亲和纯化测序
- 第10章蛋白质与RNA之间相互作用的检测
  - 10.1 RNA电泳迁移率变动分析
  - 10.2 RNA免疫沉淀
  - 10.3 紫外交联免疫沉淀
  - 10.4 RNA牵拉沉淀实验
- 附录常用试剂配制方法

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