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生物化学与分子生物学实验技术

“十一五”国家规划教材

作者:
杨安钢 刘新平 药立波
定价:
28.10元
ISBN:
978-7-04-024274-4
版面字数:
430.000千字
开本:
16开
全书页数:
276页
装帧形式:
平装
重点项目:
“十一五”国家规划教材
出版时间:
2008-06-16
读者对象:
高等教育
一级分类:
医药
二级分类:
基础医学

本教材分为三个部分;第一部分为生物化学与分子生物学常用的基本技术理论,包括分光光度技术、液相色谱技术、电泳技术、离心技术、荧光分析技术、蛋白质分离与制备技术、DNA重组技术、重组DNA的表达技术、核酸杂交技术、聚合酶链反应技术、蛋白质结构与功能研究的手段以及生物信息学分析等。第二部分为生物化学与分子生物学实验,其中包括蛋白质、酶的基本定性定量实验、代谢实验以及DNA重组实验,具有简单、实用的特点。第一部分的大多数技术在这些实验中得到了应用和体现。第三部分是附录,汇集了生物化学与分子生物学常用的数据和资料,便于查阅。

本教材可作为高等学校医学类专业五、八年制本科生生化实验课程教材,也可供相关专业的青年教师和研究生参考。

  • 前辅文
  • 第1章 分光光度技术
    • 第一节 基本原理
      • 一、 光的基本知识
      • 二、 朗伯比尔(Lambert Beer)定律
    • 第二节 分光光度计结构简介
      • 一、 光源
      • 二、 分光系统(单色器)
      • 三、 狭缝
      • 四、 比色杯
      • 五、 检测器系统
    • 第三节 分光光度技术的应用
      • 一、 测定溶液中物质的含量
      • 二、 用紫外光谱鉴定化合物
    • 第四节 分光光度法的误差
    • 第五节 常见国产分光光度计的使用
      • 一、 721型分光光度计
      • 二、 751型分光光度计
      • 三、 使用分光光度计的注意事项
    • 思考题
    • 参考文献
  • 第2章 液相色谱技术
    • 第一节 色谱原理及基本装置
      • 一、 色谱的基本理论
      • 二、 柱色谱的基本装置及基本操作
    • 第二节 凝胶色谱
      • 一、 凝胶过滤的原理
      • 二、 相关概念和基本参数
      • 三、 凝胶的分类
      • 四、 凝胶色谱的操作
      • 五、 凝胶色谱的应用
    • 第三节 离子交换色谱
      • 一、 基本原理
      • 二、 离子交换剂的类型及性质
      • 三、 离子交换剂的选择
      • 四、 离子交换色谱的操作要点
      • 五、 离子交换色谱的应用
    • 第四节 亲和色谱
      • 一、 亲和色谱的基本原理
      • 二、 亲和吸附剂
      • 三、 亲和色谱的基本操作
      • 四、 亲和色谱的应用
    • 第五节 高效液相色谱
      • 一、 高效液相色谱基本原理及特点
      • 二、 高效液相色谱流程及设备
      • 三、 高效液相色谱技术的分类与应用
      • 四、 快速蛋白液相色谱(FPLC)
    • 思考题
    • 参考文献
  • 第3章 电泳技术
    • 第一节 基本原理
    • 第二节 影响电泳的因素
      • 一、 溶液的pH
      • 二、 溶液的离子强度
      • 三、 电场强度
      • 四、 电渗现象
      • 五、 支持介质的筛孔
    • 第三节 电泳的种类和应用
      • 一、 醋酸纤维薄膜电泳
      • 二、 琼脂糖凝胶电泳
      • 三、 聚丙烯酰胺凝胶电泳
      • 四、 等电聚焦
      • 五、 毛细管电泳
      • 六、 双向电泳
      • 七、 变性梯度凝胶电泳
    • 第四节 电泳后大分子的检测
      • 一、 染色显示法
      • 二、 微量光密度计测定法
    • 思考题
    • 参考文献
  • 第4章 离心技术
    • 第一节 离心作用的基本原理
      • 一、 离心力
      • 二、 相对离心力
      • 三、 沉降速度
      • 四、 沉降系数
      • 五、 沉降时间
      • 六、 K系数
    • 第二节 离心机的类型
      • 一、 制备型离心机
      • 二、 分析型离心机
    • 第三节 制备型超速离心的分离方法
      • 一、 差速沉降离心法
      • 二、 密度梯度区带离心法
    • 第四节 离心机使用原则及注意事项
    • 思考题
    • 参考文献
  • 第5章 荧光分析技术
    • 第一节 荧光的基本知识
      • 一、 荧光的发光原理
      • 二、 荧光色素的性质
      • 三、 荧光的淬灭及抗淬灭
      • 四、 常用的荧光染料(探针)
    • 第二节 免疫荧光细胞化学和荧光原位杂交技术
      • 一、 免疫荧光细胞化学技术
      • 二、 荧光原位杂交
      • 三、 荧光显微镜
    • 第三节 流式细胞术
      • 一、 流式细胞仪的基本结构和工作原理
      • 二、 流式细胞术的应用
    • 第四节 实时荧光定量PCR技术
      • 一、 荧光定量化学原理
      • 二、 荧光定量PCR仪的光学原理
      • 三、 荧光定量原理
      • 四、 样品制备及操作
      • 五、 主要用途
    • 思考题
    • 参考文献
  • 第6章 蛋白质分离与制备技术
    • 第一节 概述
    • 第二节 选择材料及预处理
    • 第三节 细胞的破碎及细胞器的分离
      • 一、 细胞的破碎
      • 二、 细胞器的分离
    • 第四节 蛋白质的提取、分离与纯化
      • 一、 蛋白质(包括酶)的提取
      • 二、 蛋白质的分离与纯化
    • 第五节 蛋白质定量及纯度分析
      • 一、 蛋白质定量
      • 二、 蛋白质纯度鉴定
    • 第六节 蛋白质相对分子质量测定
      • 一、 SDS聚丙烯酰胺凝胶电泳测定蛋白质的相对分子质量
      • 二、 凝胶过滤法测定蛋白质的相对分子质量
      • 三、 沉降法(超速离心法)
    • 第七节 蛋白质的浓缩、干燥及贮存
      • 一、 样品的浓缩
      • 二、 干燥
      • 三、 贮存
    • 思考题
    • 参考文献
  • 第7章 DNA重组技术
    • 第一节 核酸的提取
      • 一、 DNA的提取
      • 二、 RNA的提取
      • 三、 核酸的纯化
      • 四、 核酸的浓缩
      • 五、 核酸定量及纯度分析
    • 第二节 目的基因的获取
      • 一、 直接从染色体中分离
      • 二、 化学合成法
      • 三、 RTPCR
      • 四、 构建基因组文库及cDNA文库
      • 五、 聚合酶链反应
    • 第三节 分子克隆载体与宿主细胞的选择
      • 一、 质粒
      • 二、 噬菌体
      • 三、 噬菌粒
      • 四、 黏粒
      • 五、 DNA病毒载体SV4
      • 六、 反转录病毒载体
      • 七、 宿主细胞
    • 第四节 分子克隆常用的工具酶
      • 一、 限制性核酸内切酶
      • 二、 DNA聚合酶
      • 三、 DNA连接酶
      • 四、 末端脱氧核苷酸转移酶
      • 五、 核酸酶
      • 六、 脱氧核糖核酸酶
      • 七、 碱性磷酸酶
    • 第五节 限制性内切酶对DNA的酶切及片段回收
      • 一、 限制性内切酶的选择
      • 二、 限制性内切酶的酶切
      • 三、 琼脂糖凝胶电泳分离和DNA片段的回收
      • 四、 琼脂糖凝胶中回收DNA片段的纯化
    • 第六节 外源基因与载体的连接
    • 第七节 重组DNA导入宿主细胞
      • 一、 大肠杆菌的转化
      • 二、 电脉冲穿孔法转化大肠杆菌
    • 第八节 含重组质粒的宿主菌落的筛选与鉴定
      • 一、 利用宿主细胞遗传表型的改变进行筛选
      • 二、 根据重组子分子结构特性进行鉴定
    • 思考题
    • 参考文献
  • 第8章 重组DNA的表达技术
    • 第一节 大肠杆菌表达系统
      • 一、 大肠杆菌表达载体的构成
      • 二、 常用的大肠杆菌表达载体
      • 三、 在大肠杆菌中高效表达外源蛋白的策略
      • 四、 表达产物的检测
      • 五、 原核表达系统的优缺点
    • 第二节 真核细胞表达系统
      • 一、 哺乳动物细胞表达载体
      • 二、 哺乳动物细胞的基因导入
      • 三、 表达产物的鉴定
      • 四、 其他真核表达系统
    • 思考题
    • 参考文献
  • 第9章 核酸杂交技术
    • 第一节 核酸杂交的基本理论
      • 一、 DNA变性
      • 二、 DNA复性
      • 三、 核酸分子杂交
    • 第二节 核酸探针及其标记
      • 一、 核酸探针的种类及应用
      • 二、 标记物的应用及选择
    • 第三节 核酸探针的标记方法
      • 一、 缺口平移法
      • 二、 随机引物法
      • 三、 用T4多核苷酸激酶标记DNA 5′末端
      • 四、 大肠杆菌DNA聚合酶I大片段快速标记DNA探针末端
      • 五、 非放射性物质标记核酸
    • 第四节 核酸分子杂交方法
      • 一、 核酸分子杂交的类型
      • 二、 核酸分子杂交实验因素的优化
    • 第五节 DNA芯片技术
    • 思考题
    • 参考文献
  • 第10章 聚合酶链反应技术
    • 第一节 PCR技术基本原理、特点及影响因素
      • 一、 PCR技术的基本原理
      • 二、 PCR技术的基本特点
      • 三、 影响PCR反应的因素
    • 第二节 PCR的基本步骤
    • 第三节 PCR反应条件的优化
      • 一、 PCR反应条件的常规优化方法
      • 二、 降落PCR
    • 第四节 PCR引物设计
      • 一、 PCR引物设计的基本原则
      • 二、 引物设计软件
    • 第五节 反转录PCR技术
      • 一、 反转录PCR技术的基本原理
      • 二、 反转录PCR的基本步骤
      • 三、 反转录PCR的影响因素
    • 第六节 PCR技术的应用
      • 一、 PCR技术在分子生物学领域的应用
      • 二、 PCR技术在临床医学领域的应用
    • 思考题
    • 参考文献
  • 第11章 蛋白质结构与功能研究的手段
    • 第一节 蛋白质结构分析
      • 一、 蛋白质一级结构——氨基酸组成与序列测定
      • 二、 蛋白质的高级结构分析
    • 第二节 蛋白质功能研究
      • 一、 蛋白质蛋白质相互作用的研究方法
      • 二、 蛋白质—DNA相互作用的研究方法
    • 第三节 蛋白质功能研究的其他策略
      • 一、 蛋白质芯片技术
      • 二、 质谱在大规模蛋白质相互作用分析中的应用
      • 三、 串联亲和纯化
      • 四、 纳米技术
      • 五、 RNA干扰
      • 六、 miRNA
    • 思考题
    • 参考文献
  • 第12章 生物信息学分析的基本方法
    • 第一节 核酸和蛋白质数据库
      • 一、 核酸序列数据库
      • 二、 蛋白质序列数据库
    • 第二节 综合信息检索系统
    • 第三节 序列比对分析
    • 第四节 生物信息学数据库的数据挖掘
    • 思考题
    • 参考文献
  • 实验第一部分 生物化学实验
    • 实验一 蛋白质的变性、凝固及沉淀反应
      • 一、 蛋白质的加热变性凝固
      • 二、 蛋白质沉淀反应
    • 实验二 血清白蛋白、γ球蛋白的分离纯化及鉴定
      • 一、 分离纯化
      • 二、 醋酸纤维素薄膜电泳
    • 实验三 蛋白质的定量实验
      • 一、 紫外吸收法
      • 二、 劳里法(Lowry法)
      • 三、 染料法
    • 实验四 SDS聚丙烯酰胺凝胶电泳测定蛋白质相对分子质量
    • 实验五 蛋白质印迹分析
    • 实验六 碱性磷酸酶的分离纯化及比活性的测定
    • 实验七 酶的特异性及温度、pH对酶活性的影响
      • 一、 酶的特异性
      • 二、 温度对酶活性的影响
      • 三、 pH对酶活性的影响
    • 实验八 碱性磷酸酶的Km值测定及磷酸盐对碱性磷酸酶的抑制作用
      • 一、 碱性磷酸酶的Km值测定
      • 二、 磷酸盐对碱性磷酸酶的抑制作用
    • 实验九 脲酶Km值简易测定
    • 实验十 乳酸脱氢酶同工酶分析
    • 实验十一 乳酸脱氢酶及辅酶的作用
    • 实验十二 激素对血糖的调节激素对血糖浓度的影响(葡萄糖氧化 酶法)
    • 实验十三 血清转氨酶活性的测定
    • 实验十四 血清总胆固醇测定(硫磷铁法)
    • 实验十五 尿素氮测定及回收率
  • 实验第二部分 分子生物学实验
    • 实验十六 载体的选择和制备质粒DNA的制备与纯化
    • 实验十七 DNA的纯度、浓度和构象分析
    • 实验十八 目的基因的获取
      • 一、 DNA为模板的PCR扩增实验
      • 二、 RTPCR——mRNA反转录生成cDNA
    • 实验十九 DNA的限制性内切酶消化
    • 实验二十 DNA片段回收
    • 实验二十一 DNA片段的连接反应
    • 实验二十二 用重组质粒DNA转化大肠杆菌
    • 实验二十三 含重组质粒的细菌菌落的鉴定
    • 实验二十四 地高辛精标记核酸探针的斑点杂交及免疫检测
    • 实验二十五 生物信息学分析基本方法实验
  • 附录一 实验须知
    • 一、 实验室规则
    • 二、 实验室常识
    • 三、 实验室安全
    • 四、 实验室急救
    • 五、 移液器的使用及注意事项
    • 六、 玻璃仪器的清洗及各种洗涤液的配制
  • 附录二 生物化学常用试剂的配制及参数
    • 一、 常用缓冲溶液的配制
    • 二、 百分浓度酸、碱溶液的配制
    • 三、 易变质及需要特殊方法保存的试剂
    • 四、 常用酸碱相对密度和浓度的关系
    • 五、 冷却剂和干燥剂
    • 六、 色谱法常用资料
    • 七、 常用放射性核素及测量单位
    • 八、 离心机转数
    • 九、 基本单位的词头
    • 十、 常用药品中英文对照及其分子式和相对分子质量
  • 附录三 分子生物学实验中常用的数据资料
    • 一、 常用的数据资料
    • 二、 常用贮存液的配制

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